Микроскопы

Инвертированный микроскоп

Будет не лишним подчеркнуть, что, несмотря на значительный прогресс в области количественного анализа культивированных клеток и молекулярных зондов, остается актуальным регулярное визуальное наблюдение за культурами клеток. Морфологические изменения часто являются первым признаком истощения и старения культуры, а характерные черты микробиологического загрязнения легко распознаются.

К оборудованию, необходимому для культуральной лаборатории, относится простой инвертированный микроскоп. Удостоверьтесь, что платформа микроскопа достаточно велика, чтобы поместить большой роллер-флакон между платформой и конденсором в случае, если вам потребуется исследовать такие флаконы. На рынке доступно много простых и недорогих инвертированных микроскопов, особенно ценно приобрести микроскоп с фототрубкой для цифрового фотографирования или киносъемки. Если вы заранее знаете, что будете фотографировать живые культуры, вам следует вложить в микроскоп значительные средства и приобрести прибор с высококачественной оптикой и фазово-контрастным конденсором и объективами с длиннофокусным расстоянием, а также со всем необходимым для CCD-камеры и монитора. Возрастающее использование зеленого флюоресцентного белка (GFP) для мечения живых клеток означает, что также может понадобиться флюоресцентная оптика.

Полезной приставкой к инвертированному микроскопу может быть кольцо с маркировкой компании Nikon. Это устройство вставляется в револьверную головку микроскопа на место объектива и может быть использовано для того, чтобы отмечать нижнюю часть чашки Петри, в которой расположены интересующие колонии или группы клеток. Затем эти колонии могут быть отсняты или в последующем интересующий вас участок культуры может подвергаться пристальному изучению.

Прямой микроскоп

Наряду с инвертированным микроскопом, применяемым для хромосомного анализа, определения контаминации микоплазмами и авторадиографии в лаборатории может потребоваться прямой микроскоп. На самом деле, инвертированный микроскоп применяется также для оценки состояния культуры, контаминации бактериями и грибами. Препараты авторадиографии и хромосомные препараты можно смотреть и на прямом микроскопе. Выбирайте микроскоп с высоким разрешением (Leica, Zeiss или Nikon), со светлопольной оптикой и увеличением объектива до ×100; фазово-контрастным объективом, по крайней мере, ×40, но предпочтительно ×100 и флюоресцентной оптикой с подсветкой и объективами ×40 и ×100. Флюоресцентная оптика будет использоваться для обнаружения микоплазм и исследования флюоресцентных антител. Leica предоставляет водно-иммерсионные объективы с увеличением 50×, которые, в частности, полезны для изучения стандартных препаратов микоплазм, окрашенных по Hoechst. Автоматическая цифровая камера или CCD-оборудование также полезны для фотографической формы регистрации данных или постоянных препаратов.

Конфокальный микроскоп

Цитологические исследования флюоресценции меченых клеток при высоком разрешении часто более успешны, если проводятся при помощи конфокального микроскопа. Эта техника позволяет микроскопу проводить «оптическое сечение» через образец, предоставляя изображение в одной фокальной плоскости и избегая интерференции, вызванной соседними клетками, расположенными в другой фокальной плоскости. Данные накапливаются, хранятся в цифровом виде и могут быть представлены различными способами, включая создание образа вертикального сечения образца (т. н. Z-сечение), что, в частности, полезно при осмотре трехмерной культуры.