Получение первичной культуры

Первичной называется культура, полученная за счет активного роста мигрирующих клеток из фрагмента ткани или путем ферментативной или механической дезагрегации тканей. Независимо от применяемого метода, получение первичной культуры является первым этапом в ряде селективных процессов и может в конечном итоге привести к формированию относительно единообразных клеточных линий. В первичном эксплантате селекция осуществляется за счет преимущественной способности клеток к миграции из фрагмента ткани, в то время как среди диспергированных клеток основу для формирования первичной культуры способны составить только те клетки, которые способны как к выживанию после дезагрегации, так и к адгезии к субстрату либо выживанию в суспензионной культуре. Если первичная культура сохраняется несколько часов, можно переходить к следующему шагу селекции. Количество клеток, способных к пролиферации, будет увеличиваться, некоторые типы клеток могут выживать без деления и увеличения числа клеток, а прочие могут оказаться неспособными к выживанию в данных условиях культивирования.

Следовательно, относительное соотношение клеточных типов в культуре будет постоянно изменяться. Для монослойной культуры этот динамический процесс будет продолжаться до тех пор, пока не будет заполнена вся площадь субстрата. Следует понять, что первичная культура, вполне пригодная для проведения цитогенетического анализа и некоторых других целей, может не походить для других видов исследований в результате ее нестабильности. Как изменчивость клеточной популяции, так и адаптивные модификации отдельных типов клеток постоянно имеют место в ходе развития культуры, затрудняя определение периода, в котором культура может расцениваться как гомогенная или стабильная.

Состояние, когда все доступные для роста области заняты и клетки находятся в плотном контакте друг с другом, называется стадией сливного роста, а культуру называют конфлюэнтной. В конфлюэнтной культуре клетки, рост которых чувствителен к контактному ингибированию, а клеточная плотность ограничивает клеточную пролиферацию, прекращают деление, в то время как любые трасформированные клетки, нечувствительные к плотности популяции, будут продолжать избыточный рост. Поддержание постоянно низкой плотности популяции (например, частым субкультивированием) помогает сохранить нормальный фенотип клеток в культуре, имеющей при повышении плотности клеточной популяции склонность к спонтанной трансформации и избыточному росту, например культуры мышиных фибробластов [Тобаго & Green,1963].

Некоторые аспекты специализированных функций выражены сильнее в первичной культуре, в частности в конфлюэнтной культуре. На этой стадии культура обнаруживает наибольшее морфологическое сходство с родительской тканью и сохраняет некоторое разнообразие клеточных типов.