Работа на открытой поверхности

Схема

Очистите и протрите рабочую зону, принесите бутылки, пипетки и т.д. Сначала выполните подготовительные действия. Обожгите в пламени, если необходимо, используемые предметы, сохраняйте рабочую поверхность свободной и чистой. В конце работы очистите и вытрите рабочую поверхность 70%-м этанолом.

Материалы

Стерильные:

  • Среда Игла 1×MEM с солями Хэнкса и HCO3, без антибиотиков — 100 мл
  • Пипетки, градуированные и заткнутые ватной пробкой. Если используются стеклянные, то различных размеров: 1 мл, 5 мл, 10 мл, 25 мл, в квадратном пенале, Если используется пластик, — в индивидуальной упаковке, рассортированные по размерам в штативе.
  • Культуральные флаконы

Нестерильные:

  • Пипетирующее устройство или груша
  • 70%-й этанол в пульверизаторе
  • Не оставляющие ворса салфетки или щетки
  • Абсорбирующие бумажные салфетки
  • Цилиндр для пипеток, содержащий воду и дезинфицирующее вещество
  • Бунзеновская горелка (или ее эквивалент) и зажигалка
  • Ножницы
  • Маркер с этанол-устойчивыми чернилами
  • Ручка, тетрадь, протоколы и т. д.

Протокол

1. Протрите рабочую поверхность стола 70%-м этанолом.

2. Принесите среду и т. д. из холодного хранилища, на водяной бане или иным способом разморозьте принесенные из морозильника реактивы, протрите бутылки спиртом, разместите то, что вам потребуется сначала, на рабочем столе, оставив остальное поблизости в стороне.

3. Соберите пипетки и разместите с одной стороны задней части рабочего места в доступном месте.
а) Если используются стеклянные пипетки, откройте пеналы с пипетками и поместите крышки рядом, внутренней стороной наверх.
б) С пластиковых пипеток удалите внешнюю упаковку, рассортируйте индивидуально упакованные пипетки по размерам в штативе или в металлических банках.

4. Соберите другую стеклянную и пластиковую посуду, инструменты и т. д. и поместите поблизости.

5. Обожгите горлышки бутылок, быстрым движением повернув их в пламени горелки и ослабьте крышки.

6. Выберите пипетку.
а) Если пипетки стеклянные:

i) возьмите пипетку из пенала, поднимая ее параллельно другим пипеткам в пенале и прикасаясь к ним так мало, как это возможно, в частности к верхним их частям (если пипетка, которую вы достаете, коснулась носиком верхних частей любой из других пипеток, еще находящихся в пенале, сбросьте ее);

ii) вставьте верхний конец пипетки в пипе-тирующее устройство, держа пипетку в направлении от вас и закрепите ее над градуировкой, так чтобы часть пипетки, входящая в бутыль, не была загрязнена.

б) Если пипетки пластиковые:

i) откройте упаковку в верхней части пипеток;

ii) расслоите концы упаковки пипеток, поворачивая их снаружи внутрь;

iii) вставьте конец пипетки в грушу или пипетирующее устройство;

iv) извлеките пипетку из упаковки, не касаясь других пипеток или упаковки, а также любых нестерильных поверхностей;

v) выбросьте обертку в мусорную корзину.

7. Обожгите пипетку (только стеклянную!) в пламени горелки, проводя ее по длине через пламя и одновременно поворачивая на 180°. Это должно занять 2–3 с, иначе пипетка станет слишком горячей. Не стремитесь простерилизовать пипетку таким образом; вы просто стараетесь сжечь пыль, которая могла осесть на пипетку. Если вы прикоснулись кончиком пипетки к нестерильной поверхности или могли контаминировать ее каким-то иным образом, сбросьте ее в дезинфицирующий раствор для повторного мытья, не пытайтесь вновь сделать ее стерильной в пламени горелки.

8. Вставьте пипетку в пипетирующее устройство или грушу, направляя ее от вас и закрепив ее над градуировкой так, чтобы кончик пипетки, который будет входить в бутылку или флакон, не загрязнялся.

Требование безопасности. Если вы вставляете пипетку в грушу или пипетирующее устройство, обратите внимание на то, чтобы не прилагать слишком больших усилий: пипетка может сломаться при давлении.

Не обжигайте в пламени пластиковые пипетки.

9. Пипетка в пипетирующем устройстве или груше должна располагаться в правильном направлении и под правильным углом в вашей руке. Проследите, чтобы кончик пипетки не касался внешней стороны бутылки или пенала с пипетками. Всегда осознавайте, где находится пипетка. Выполнение этой процедуры нелегко, когда вы овладеваете методами асептики, но это важное требование для успешной работы и со временем вы приобретете опыт.

10. Удерживая пипетку в направлении от вас, удалите крышку с первой бутылки, зажав ее между мизинцем и ладонью. Если вы разливаете жидкость в несколько бутылей или флаконов, их можно положить горизонтально на бок. Работая с бутылками, наклоните их так, чтобы ваша рука не проходила над открытым горлышком. Если у вас будут трудности с удерживанием крышки при пипетировании, разместите ее на столе рядом с горелкой открытой стороной вниз. Если бутылки должны оставаться в открытом положении, их следует наклонить так близко к горизонтальному положению, как это возможно, на столе или опоре для бутылок.

11. Обожгите горлышко бутылки.

Замечание. При обжигании бутылей Duran не используйте бутыли с кольцами для разлива.

12. Наклоните бутыль со средой по направлению к пипетке так, чтобы ваша рука не проходила над открытым горлышком.

13. Отберите необходимое количество жидкости и удерживайте ее в пипетке.

14. Обожгите горлышко бутылки и закройте крышку.

15. Снимите крышку с оставшейся бутылки, обожгите горлышко, внесите жидкость, обожгите горлышко, закройте крышку.

16. Плотно заверните все крышки по окончании работы.

17. По завершении операции уберите с рабочей поверхности основные растворы, оставив только те бутыли, которые потребуются.