Асептические методы работы в вертикальном ламинарном потоке

Схема

Очистите и протрите рабочую зону, принесите бутылки, пипетки и т.д. Сначала выполните подготовительные действия (приготовление среды и реактивов), затем культуральную часть работы. В конце работы очистите и вытрите рабочую поверхность 70%-м этанолом.

Материалы

Стерильные:

  • Среда Игла 1 × МЕМ с солями Хэнкса и HCO3, без антибиотиков — 100 мл
  • Пипетки, градуированные и заткнутые ватной пробкой. Если используются стеклянные, то различных размеров: 1 мл, 5 мл, 10 мл, 25 мл, в квадратном пенале, Если используется пластик, — в индивидуальной упаковке, рассортированные по размерам в штативе.
  • Культуральные флаконы 25 см2 — 10 шт

Нестерильные:

  • Пипетирующее устройство или груша
  • 70%-й этанол в пульверизаторе
  • Не оставляющие ворса салфетки или щетки
  • Абсорбирующие бумажные салфетки
  • Цилиндр для пипеток, содержащий воду и дезинфицирующее вещество
  • Ножницы
  • Маркер с этанол-устойчивыми чернилами
  • Ручка, тетрадь, протоколы и т. д.

Протокол

1. Протрите рабочую поверхность и все другие поверхности внутри ламинар-бокса, включая внутреннюю часть переднего экрана 70%-м этанолом при помощи не оставляющих ворса салфеток или щетки.

2. Принесите среду и т. д. из холодного хранилища, на водяной бане или иным способом разморозьте принесенные из морозильника реактивы, протрите бутылки спиртом, разместите те, что вам потребуются сначала, в ламинарном шкафу.

3. Соберите пипетки и разместите с одной стороны задней части рабочего места в доступном месте.
а) Если используются стеклянные пипетки, откройте пеналы с пипетками и поместите крышки рядом, внутренней стороной наверх.
б) С пластиковых пипеток удалите упаковку, рассортируйте по размерам в штативе или в металлических банках.

4. Соберите другую стеклянную и пластиковую посуду, инструменты и т.д. и поместите поблизости (на тележке или соседнем столе).

5. Ослабьте, но не снимайте крышки всех бутылок, которые будут использованы.

6. Снимите крышку с тех бутылок, куда вы будете наливать жидкость, откуда будете переносить ее пипеткой. Поместите крышки от бутылок открытой стороной на самом высоком месте рабочей поверхности в дальней части ламинар-бокса за бутылками, так чтобы ваша рука не проходила над ней во время манипуляций. Если вы одномоментно используете только одну бутыль и открываете только одну крышку, вы можете после открывания бутыли удерживать крышку в руке между мизинцем и ладонью и после пипетирования снова надевать ее на бутыль.

7. Возьмите пипетку.

а) Если пипетки стеклянные:

i) возьмите пипетку из пенала, вынимая ее параллельно другим пипеткам в пенале и прикасаясь к ним так мало, как это возможно, в том числе к верхним их частям (если пипетка, которую вы достаете, коснулась носиком верхних частей других пипеток, еще находящихся в пенале, сбросьте ее в цилиндр для использованных пипеток);

ii) вставьте верхний конец пипетки в пипе-тирующее устройство, держа пипетку в направлении от вас и закрепите ее над градуировкой, так чтобы часть пипетки, входящая в бутыль, не была загрязнена.

Требование безопасности. Если вы вставляете пипетку в грушу или пипетирующее устройство, обратите внимание на то, чтобы не прилагать слишком больших усилий: пипетка может сломаться при давлении.

б) Если пипетки пластиковые:

i) откройте упаковку в верхней части пипеток;

ii) расслоите концы упаковки, поворачивая их снаружи внутрь;

iii) вставьте конец пипетки в грушу или пипетирующее устройство;

iv) извлеките пипетку из упаковки, не касаясь других пипеток или упаковки, а также любых нестерильных поверхностей;

v) Выбросьте обертку в мусорную корзину.

8. Пипетка в пипетирующем устройстве или груше должна располагаться в правильном направлении и под правильным углом в вашей руке. Проследите, чтобы кончик пипетки не касался внешней стороны бутылки или внутренней поверхности ламинарного бокса. Всегда следите, где находится пипетка. Выполнение этой процедуры нелегко, когда вы овладеваете методами асептики, но это важное требование для успешной работы и со временем вы приобретете опыт.

9. Наклоните бутыль со средой по направлению к пипетке так, чтобы ваша рука не проходила над открытым горлышком и, используя 5-мл пипетку, отберите 5 мл среды и перенесите ее в 25 см3 флакон, также наклоненный.

10. Повторите еще 4 раза, заполнив 4 флакона. Когда разливаете жидкость в несколько бутылей или флаконов, их можно положить горизонтально на бок. Убедитесь, что флаконы лежат надежно и ваша рука не проходит над открытыми горлышками.

11. Сбросьте стеклянные пипетки в цилиндр для использованных пипеток, содержащий дезинфицирующий раствор. Пластиковые пипетки должны быть сброшены в мешок для автоклавирования потенциально биологически опасных материалов.

12. Заверните крышки на флаконы.

13. Повторите процедуру, используя 25-мл пипетку для переноса 5 мл в каждый из 5 флаконов.

14. Закройте крышки на бутылках со средой и флаконах. Бутылки могут быть открыты, пока вы работаете, но всегда должны быть закрыты прежде, чем вы покинете место у ламинарного бокса по какой-то причине.

Замечание: В ламинарном шкафу с вертикальным потоком не работайте непосредственно над открытым сосудом. При горизонтальном потоке не работайте за открытым сосудом.

15. По завершении операции плотно заверните все крышки, уберите все растворы и материалы, которые больше не требуются, с рабочей поверхности.