Пипетирование

Стандартные стеклянные или пластиковые пипетки до сих пор остаются самым простым приспособлением для манипуляций с жидкостями. Иногда используются шприцы, но их употребление ограничено, поскольку стандартные иглы слишком коротки для большинства сосудов. Работа со шприцом может также создать напряжение сдвига, повреждающее клетки, когда вы разливаете суспензию клеток, кроме того, возрастает риск укалывания и введения себе биологического материала. Канюли с широким просветом имеют преимущества перед стандартными иглами, но их использование замедляет процесс, за исключением применения многоступенчатого диспенсера.

Можно выбрать пипетки удобного размера, набор пипеток объемом 1 мл, 2 мл, 5 мл, 10 мл, и 25 мл удовлетворит все ваши потребности, хотя существуют и 100-мл пипетки (BD Biosciences), которые удобны при приготовлении и разливании среды. Использование пипеток с быстрым сливом снижает точность и аккуратность работы, но дает значительный выигрыш в скорости. Если вы используете стеклянные пипетки и вам требуется только несколько пипеток каждого объема, при упаковке пипеток в контейнер для стерилизации используйте смешанный набор. Одноразовые пластиковые пипетки должны иметь двойную оболочку, верхняя из которых удаляется до помещения в ламинарный шкаф. Неиспользованные пипетки должны храниться в беспылевом контейнере.

Пипетирование ртом должно быть исключено, поскольку оно является дополнительным фактором микоплазматического заражения и может представлять биологическую опасность для оператора (например, при работе с вирусинфицированными клеточными линиями, биопсийным или аутопсийным материалом от человека, или другими объектами, обладающими потенциальной биологической опасностью). Производителями предлагаются недорогие груши и электрические пипетирующие устройства; постарайтесь выбрать из этого оборудования то, что подходит вам. Инструмент, который вы выберете, должен подходить к пипеткам всех используемых размеров без применения каких-либо усилий для вставления и удаления пипеток. Регуляция потока жидкости должна быть легкой и быстрой. Устройство должно позволять многократно засасывать и выливать из пипетки жидкость (например, при суспендировании) без разбрызгивания, быть легким и удобно располагаться в руке так, чтобы длительная работа не вызывала утомления.

Автоматическая пипетки, в частности, удобны для малых объемов (1 мл и меньше), хотя большинство производителей предлагает автоматические пипетки объемом до 5 мл. Поскольку затруднительно достать до дна сосуда большого объема носиком наконечника, не касаясь при этом внутренней части его горлышка нестерильными частями корпуса, автоматические пипетки следует использовать только при работе с маленькими флаконами или с применением промежуточных соединений с другими емкостями, такими как универсальный контейнер. Кроме того, при работе с большими объемами следует использовать удлиненные наконечники. В частности, автоматические пипетки полезны при микротитрационном анализе и других манипуляциях с многолуночными планшетами, но не следует использовать их при серийном ведении культуры, если только не используются специальные наконечники с фильтрами. Многоканальные автоматические пипетки (с 4, 8 или 12 каналами) удобны для работы на микротитрационных планшетах.

Пипетирование в культуре тканей часто представляет собой компромисс между точностью и скоростью выполнения работы; скорость требуется для того, чтобы свести к минимуму повреждение клеток при манипуляциях с ними, в т.ч. субкультивировании, а аккуратность и точность — для воспроизводимости результатов при стандартных условиях культивирования. Тем не менее, приемлемая ошибка обычно составляет ±5%, кроме таких условий эксперимента, когда может потребоваться большая точность. В целом, использование пипеток меньшего объема согласуется с возможностью большей точности, требуемой для получения количественных данных.

Необходимо вставлять ватную пробку в верхнюю часть стеклянной пипетки до стерилизации, для того чтобы сохранить стерильность пипетки в ходе использования. Пробка предохраняет загрязнение из груши или пипетирующего устройства и уменьшает риск перекрестной контаминации из содержимого пипетки. Если ватная пробка становится влажной, замените пипетку, поместив использованную в дезинфектант, с последующим мытьем. Затыкание пипеток ватными пробками перед стерилизацией — достаточно утомительная работа, так же как удаление этих пробок перед мытьем. Производители предлагают автоматические устройства для затыкания пипеток ватными пробками; они ускоряют и облегчают процесс.

Пластиковые пипетки поступают уже с пробками. Однако работа с ними идет медленнее, поскольку каждая пипетка имеет индивидуальную обертку, которая требует удаления перед использованием и неэкономична, если несколько пипеток обернуто вместе (часть неиспользованных пипеток всегда теряется, поскольку нецелесообразно хранить и в следующий раз использовать однажды открытую упаковку), а также связана с относительно высоким риском контаминации, поскольку процедура вынимания пипетки из обертки более подвержена риску контаминации, чем изъятие из контейнера. Тем не менее к достоинствам пластиковых пипеток относится то, что они более свободны от бактериальных и химических загрязнений, чем стеклянные, и при этом не требуют времени на мытье и стерилизацию.